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와편모조류 Heterocapsa circularisquama HcRNAV34 virus like particle의 발현, 정제,자가조립 및 숙주특이적 살조능

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Author(s)
주선이
Issued Date
2012
Abstract
Virus-like particles (VLPs) have received considerable attention for vaccine, drug delivery, gene therapy and material science applications. Especially, recombinantly expressed VLPs of HcRNAV (a single-standard RNA virus specifically infecting the dinoflagellate, Heterocapsa circularisquama) is considered as a novel potent carrier for harmful algal bloom. In the present study, HcRNAV34 VLPs were expressed in E. coli BL21(DE3) host system and the VLPs were purified using chitin-binding affinity column chromatography. A novel organic synthesized algicidal substance, thiazolidinedione (TD49), was encapsulated into HcRNAV34 VLPs by dissociation and reassociation processes and its encapsulation was detected by HPLC analysis. HcRNAV34 VLPs encapsulating TD49 specifically attached and destroyed the cells of H. circularisquama HU9433-P, which is the host of HcRNAV34 virus, but not the cells of H. circularisquama HY9423, which is the host of HcRNAV109 virus. These results indicate that HcRNAV34 VLPs have considerably high host specificity and is compatible with a common viral property of host specific infection. On the basis of above results, we suggest the possibility which to develop biological control method of harmful algal blooms using HcRNAV34 VLPs embedded with algicidal substances.
Alternative Title
Expression, purification, self assembly and host specific algicidal activity of virus like particle of Heterocapsa circularisquama HcRNAV34
Alternative Author(s)
Ju Sun Yi
Affiliation
환경공학과
Department
일반대학원 환경공학과
Advisor
김시욱
Awarded Date
2013-02
Table Of Contents
TABLE OF CONTENTS
TABLE OF CONTENTS
LIST OF TABLES
LIST OF FIGURES
ABSTRACT
제 1 장 서 론
제 1 절 연구배경
제 2 절 연구목적
제 2 장 실험 재료 및 방법
제 1 절 효소 및 시약
제 2 절 사용균주 및 플라스미드
제 3 절 재조합 DNA 제조
1. 유전자 합성
2. HcRNAV34 유전자 증폭
3. 유전자 단편 TA 클로닝
4. 플라스미드 정제 및 염기서열 확인
5. 제한효소 처리와 DNA 단편 분리
6. Ligation 및 형질전환
7. Competent cell 제조
8. 형질전환된 균체로부터 재조합 플라스미드 확인
9. SDS-PAGE를 이용한 단백질 발현 확인
제 4 절 HcRNAV34 캡시드 단백질 발현 및 정제
1. HcRNAV34 캡시드 단백질 발현
2. 온도 및 IPTG농도에 따른 최적발현 조건 탐색
3. Western blot analysis
4. Cell free extract의 제조
5. Chitin column을 이용한 HcRNAV34 캡시드 단백질 정제
6. N-terminal amino acid sequencing

제 5 절 HcRNAV34 VLPs의 조립
1. Dissociation와 reassociation 과정을 통한 조립
2. HcRNAV34 VLPs의 구조
제 6 절 FITC를 이용한 HcRNAV34 캡시드 단백질의 표지
제 7 절 HcRNAV34 VLP의 숙주 특이성 관찰
제 8 절 HPLC를 이용한 HcRNAV34 VLP에 탑재된 TD49정량
분석
제 9 절 숙주에 대한 TD49가 탑재된 HcRNAV34 VLP의
살조 효과

제 3 장 결과 및 고찰
제 1 절 HcRNAV34 유전자 합성
제 2 절 HcRNAV34 유전자의 클로닝 및 발현
1. HcRNAV34 유전자의 클로닝
2. HcRNAV34 캡시드 단백질의 최적발현 조건 확립
제 3 절 HcRNAV34 캡시드 단백질 정제
1. Chitin column을 이용한 HcRNAV34 캡시드 단백질의 정제
2. N-terminal amino acid sequencing
제 4 절 HcRNAV34 VLPs의 구조
제 5 절 FITC를 이용한 HcRNAV34 캡시드 단백질의 표지
제 6 절 HcRNAV34 VLPs의 숙주 특이성 관찰
제 7 절 HPLC를 이용한 HcRNAV34 VLPs에 탑재된 TD49정량
분석
제 8 절 숙주에 대한 TD49가 탑재된 HcRNAV34 VLPs의
살조 효과

제 4 장 결론

참고문헌
Degree
Master
Publisher
조선대학교 대학원
Citation
주선이. (2012). 와편모조류 Heterocapsa circularisquama HcRNAV34 virus like particle의 발현, 정제,자가조립 및 숙주특이적 살조능.
Type
Dissertation
URI
https://oak.chosun.ac.kr/handle/2020.oak/9750
http://chosun.dcollection.net/common/orgView/200000263730
Appears in Collections:
General Graduate School > 3. Theses(Master)
Authorize & License
  • AuthorizeOpen
  • Embargo2012-12-21
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