자외선 조사에 의하여 생성되는 세포내 활성산소 조절에 관여하는 RRM3의 역할
- Issued Date
- 2009
- Abstract
- ABSTRACT
자외선 조사에 의하여 생성되는 세포내 활성산소 조절에 관여하는 RRM3의 역할
문 재 원
지도교수: 양 정 열
의학과
조선대학교 대학원
p53에 의하여 발현이 조절되는 RRM3는 세포 내에서 활성산소 생성을 증가시켜 세포 사멸사를 유도하는 것으로 알려져 있으나 RRM3에 의한 활성산소 생성 기작은 아직 규명되지 못하였다. 본 연구에서는 RRM3에 의한 활성산소 생성 기작을 규명하기 위하여, RRM3와 결합하는 항산화제를 탐색하여 활성산소 중 과산화수소를 제거하는 catalase가 RRM3와 결합함을 yeast two hybridization 방법으로 발견하였다. RRM3와 catalase의 결합은 자외선 조사에 의하여 현저하게 증가 함을 co‐immunoprecipitation 및 면역형광법에 의하여 확인하려 하였다. 또한 분리한 RRM3 및 catalase 단백질을 사용하여 두 단백질이 직접 결합함을 규명하였다. RRM3를 과발현시키면 세포의 catalase활성이 감소되고 활성산소가 증가하였으며, 반면에 RRM3를 siRNA로 결핍시키면 세포내 catalase 활성이 증가하고 활성산소 생성이 감소하였다. RRM3과발현 세포에 자외선을 조사하면 catalase활성이 현저하게 감소되고 활성산소가 증가하여 세포 사멸사가 대조세포에 비하여 현저하게 증가되었으며 이들 세포에 catalase를 과발현시키면 RRM3에 의한 세포 사멸사가 현저하게 감소하였다. 따라서 RRM3는 사람세포에서 catalase활성을 감소시켜 활성산소를 생성하고 세포사멸사를 유발하는 것으로 판단되었다.
- Alternative Title
- A role of RRM3 for the regulation of intracellular reactive oxygen species in response to UV irradiation
- Alternative Author(s)
- Moon jae won
- Affiliation
- 조선대학교
- Department
- 일반대학원 의학과
- Advisor
- 양정열
- Awarded Date
- 2010-02
- Table Of Contents
- CONTENTS
ABSTRACT
I. INTRODUCTION --------------------------------------------- 1
II. MATERIALS AND METHODS --------------------- 4
1. Materials
2. Cell culture
3. UV irradiation
4. Immunoprecipitation assay and Western blot analysis
5. Expression and purification of recombinant proteins
6. Plasmid constructs and clones
7. Expression of p53, p53R2, and catalase by the adenovirus system
8. Small‐interference RNA (siRNA) knockdown of p53, p53R2, and catalase
9. Measurement of intracellular ROS levels
10. Assay for catalase activity
11. Apoptosis assay
12. Immunofluorescence microscopy
13. Yeast two‐hybrid analysis
14. Statistical analysis
III. RESULTS ---------------------------------------------- 13
1. RRM3 interacts with catalase in vivo and in vitro
2. Catalase interacts with the C‐terminal regions of RRM3
3. RRM3 negatively regulates catalase activity in vivo and in vitro
4. RRM3 increases intracellular ROS levels by inhibition of catalase activity
5. C‐terminal of RRM3 required for modulation of catalase activity
6. RRM3‐mediated suppression of catalase function is involved in RRM3‐induced apoptosis in response to UV irradiation
IV. DISCUSSION ----------------------------------------------- 32
V. REFERENCES ----------------------------------------------- 36
- Degree
- Doctor
- Publisher
- 조선대학교
- Citation
- 문 재 원. (2009). 자외선 조사에 의하여 생성되는 세포내 활성산소 조절에 관여하는 RRM3의 역할.
- Type
- Dissertation
- URI
- https://oak.chosun.ac.kr/handle/2020.oak/8581
http://chosun.dcollection.net/common/orgView/200000239513
- Appears in Collections:
- General Graduate School > 4. Theses(Ph.D)
- Files in This Item:
-
-
Download
자외선 조사에 의하여 생성되는 세포내 활성산소 조절에 관여하는 RRM3의 역할.pdf
기타 데이터 / 991.16 kB / Adobe PDF
-
Items in Repository are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.