Stimulation of Proliferation and Migration of Oral Carcinoma Cells by SLPI

Abstract

분비백혈구단백분해효소억제제(SLPI)는 serine 계열의 단백질을 분해하는 효소의 억제인자로서 항균 및 항진균작용을 하는 것으로 알려졌고, 더불어 세포의 증식과 상처치유를 촉진하는 것과 관계가 있는 것으로 밝혀졌다. 또한 최근에는 SLPI가 암세포의 증식과 이동을 조절한다는 연구 결과들이 보고되었고, 몇몇 연구에서는 SLPI의 발현 수준과 종양의 진행 사이에 직접적이 S관계가 있다고 알려졌다. 하지만 구강암세포주의 증식 및 이동과 SLPI의 관계에 대한 연구는 거의 이루어지지 않았다. 따라서 본 연구의 목적은 비강인두의 상피세포에서 발생한 악성종양 세포주인 KB세포를 이용해 SLPI가 구강암세포의 증식과 이동을 촉진시키는지의 여부를 알아보고자 하였다. 실험결과 혈청을 제거한 배양액에서 KB세포는 생존율에 큰 변화가 없었고 RT-PCR, Northern blotting 그리고 Western blotting 에서도 SLPI발현에는 변화가 나타나지 않았다. 그런데 세포증식 및 이동 실험에서 SLPI는 KB 세포의 증식과 이동을 모두 증가시키는 것으로 나타났다. 또한 상처회복 실험 결과 SLPI 단백질은 KB 세포의 상처 치유 및 그에 따른 세포 이동을 확실히 증가시켰으며, 상처가 유발된 KB세포로부터 SLPI 단백질이 분비되는 것이 확인되었다. 따라서 본 연구의 실험 결과들은 SLPI 단백질이 구강암 진행의 조절 인자로서 KB세포의 증식과 이동에 중요한 역할을 할 것으로 생각된다.|Secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) is a constitutively expressed, up-regulative inhibitor of serine protease, which has the function such as the anti-bacterial and anti-fungal activity. Besides, it also involved in promoting cell proliferation and wound healing in vitro. Recently, SLPI has been linked to regulating the proliferation and migration of cancer cells. KB cell is a cell line derived from a human carcinoma of the nasopharynx, used as an assay for antineoplastic agents. Several studies have reported a direct correlation between SLPI expression levels and tumor progression. However there was no evidence in oral carcinoma cells. Therefore, the objective of this study is to identify whether SLPI may promote proliferation and migration of KB cell or not. We have conducted cell viability analysis, RT-PCR, northern blot, western blot, MTT assay, migration assay, wound healing assay and immunoprecipitation. KB cell viability was not affected by serum starvation in cell viability analysis and SLPI expression was not affected by serum starvation in RT-PCR, northern blot and western blot analysis. SLPI promoted KB cell proliferation and migration in MTT and migration assay respectively. It was also found that SLPI significantly increased wound healing and migration rate of KB cell in response to scratched artificial wounding in wound healing assay. And it was also confirmed artificial wounds induced the secretion of SLPI protein in wound healing assay. These results indicate that SLPI may have an important role for proliferation and migration of KB cell, suggesting as a modulating molecule in oral cancer progression.