Comparison of Conventional, Nested, Real-time PCR for Rapid and Accurate Diagnosis of Patients with Vibrio vulnificus

Abstract

배 경: 비브리오 불니피쿠스 패혈증은 빠른 진행과 사망률이 50%에 이르는 치명적인 질환이다. 지금까지 비브리오 불니피쿠스균에만 특이성을 갖는 동일 유전자를 대상으로 실시간 중합효소연쇄반응 (Q-PCR), 이중중합효소연쇄반응 (N-PCR), 중합효소연쇄반응 (C-PCR)를 비교한 연구가 거의 시행된바 없다. 저자는 실시간 중합효소연쇄반응이 진단기술로써 유용한지 알아보기 위해 두 개의 병원에 피부와 연조직 감염으로 내원한 환자들의 샘플을 가지고 실험을 하였다. 이 논문에서 세 종류의 중합효소연쇄반응을 실행하고 그 결과와 현재 표준 진단법으로 사용되는 미생물 배양 결과의 비교 연구를 수행하였다.

방 법: 시동체와 탐색자는 비브리오 불니피쿠스 내에 ToxR 유전자를 표적으로 디자인하였다. 표준균주 30개, 2006~2007년 봉와직염과 괴사성근막염이 의심되어 내원한 환자중 비브리오 불니피쿠스 감염증으로 확진된 환자 22명의 혈액, 비브리오 불니피쿠스에 감염된 환자로부터 얻은 임상 분리주 30개, 비브리오 불니피쿠스 이외의 다른 원인균이 확인된 환자 19명의 혈액을 이용하여 중합효소연쇄반응 (Q-PCR), 이중중합효소연쇄반응 (N-PCR), 중합효소연쇄반응 (C-PCR)을 실행하여 미생물 배양검사법과 비교 연구 하였다. 결 과: 표준균주에서 Q-PCR은 5 copies/㎕까지 검출할 수 있고 양성과 음성을 나누는 cp값은 균에서는 30 cp값 이상으로 하였을 때 비브리오 불니피쿠스만 양성으로 읽었다. 임상분리주에서는 중합효소연쇄반응과 실시간 중합효소연쇄반응에서 비브리오 불니피쿠스만 양성으로 검출되었다. 환자들의 혈액을 이용한 고전적 중합효소연쇄반응 검사상 민감도가 45% 특이도는 100%였고, 이중중합효소연쇄반응의 민감도는 86%이고 특이도는 73% 였다. 양성과 음성을 나누는 cp값을 38 이상으로 정의 하였을 때 실시간 중합효소연쇄반응에서는 100%의 민감도와 특이도를 보였다. 실시간 중합효소연쇄반응이 가장 민감성과 특이성 좋은 검사임을 확인할 수 있었다.

결 론: 비브리오 불니피쿠스를 정확하고 빠른 진단하기 위해 세 가지의 실험법 중실시간 중합효소연쇄반응은 다른 실험법에 비해 특이성과 민감성이 좋을 뿐 아니라 빠르게 검출할 수 있는 방법임을 확인하였으며 실시간 중합효소의 적절한 사용은 환자들의 사망률을 줄이는 데 크게 기여할 수 있으리라 사료된다.