Relationship between down-regulated expression of breast cancer resistance protein and overexpression of P-glycoprotein

Abstract

P-glycoprotein (Pgp), multidrug resistance-associated protein (MRP) 및 breast cancer resistance protein (BCRP) 등의 세포막 수송체의 과발현은 암세포에 다약물 내성을 일으키는 주된 원인이 되고 있다. 본 연구는 이 수송체들의 발현이 서로 연관되어 있는지 확인하기 위하여 수행되었다. 유전자 발현은 RT-PCR방법, Western blot 및 면역화학염색법으로 분석하였다. 약물 감수성 폐암 세포주인 SK-MES-1/WT세포는 낮은 수준의 Pgp, 중등도 수준의 MRP 및 높은 수준의 BCRP를 발현하였으나, doxorubicin내성 세포주인 SK-MES-1/DX1000세포는 높은 수준의 Pgp, 중등도 수준의 MRP 및 낮은 수준의 BCRP을 발현 하였다. 본 실험에서 관찰된 SK-MES-1/DX1000세포에서 Pgp발현이 증가에 의해 BCRP 발현이 감소하는 현상이 Pgp 억제제(PSC833 및 verapamil)와 MDR1 siRNA를 이용해 Pgp발현을 knock-down시킨 방법으로 부분적으로 회복되었다. 이 결과는 오염된 클론에 의해 얻어진 것이 아니라는 것을 이중 면역화학염색법을 이용하여 공초점 현미경으로 확인하였다. 이 같은 결과는 같은 세포내에서 Pgp가 특이적으로 BCRP발현을 기능적으로 저하한다는 것을 시사한다. PSC833은 SK-MES-1/DX1000세포에서 BCRP발현 및 c-Jun의 인산화를 증가시켰다. Dominant-negative c-Jun (DN-c-Jun)의 발현은 PSC833에 의한 BCRP발현 증가를 부분적으로 차단하였다. 이상의 결과는 폐암 세포주 SK-MES-1/DX1000세포에서 Pgp가 BCRP의 발현을 기능적으로 감소시키며, 이 같은 현상에 c-Jun이 적어도 부분적으로 매개한다는 최초의 증거를 제시하고 있다.