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치주인대섬유모세포의 노화과정에서 MMP-1, TIMP-1, PDLs22의 발현

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Author(s)
조일준
Issued Date
2005
Keyword
노화과정|복제노화|사람치주인대섬유모세포|aging|replicative senescence|hPDLF|TIMP-1|MMP-1|PDLs22|gene expression
Abstract
치주 조직의 치유를 위해서는 다양한 세포들로 분화할 수 있는 능력을 가진 치주인대섬유모세포가 매우 중요하다. 이에 본 연구의 목적은 치주조직 치유에 필수적인 사람치주인대 섬유모세포의 노화과정에 따른 세포의 형태학적 변화와, 유전자들의 발현 양상을 상호 비교하고자 하였다.
사람치주인대섬유모세포는 조선대학교 치과병원에 내원환 환자 중 치주질환과 충치가 없는 교정적 목적으로 발거된 치아를 대상으로 환자 동의하에 채취하였다. 일차 배양한 후 계대배양을 통해 노화를 유도하였다. 2, 4, 8, 16, 18, 21세대 세포를 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM, Gibco BRL, USA)을 이용하여 5% CO2, 37℃, 100% 습도 조건에서 배양한 후 실험에 이용하였다. MMP-1, TIMP-1, PDLs22, Type I collagen, Fibronectin, TIMP-2, telomerase mRNA의 발현 유무를 파악하기 위하여 역전사중합효소연쇄반응을 실행하였다.
본 연구에서는 사람치주인대섬유모세포에서 노화과정에 따른 세포학적 형태 변화 및 유전자의 발현 양상을 조사한 결과,
1. 사람치주인대섬유모세포는 노화가 진행될수록 크기가 커지고, 마지막 세대에서는 세포가 죽어가는 소견을 나타내었다.
2. 사람치주인대섬유모세포의 특이 유전자인 PDLs22 mRNA는 2세대, 4세대, 6세대의 젊은 사람치주인대섬유모세포에서 발현되었다.
3. TIMP-1 mRNA는 2세대, 4세대의 젊은 사람치주인대섬유모세포에서 발현되었다.
4. MMP-1 mRNA는 18세대 이상에서 미세하게 발현되는 경향을 나타내었다.
5. Type I collagen mRNA는 거의 모든 세대에서 발현되었으나, 마지막 세대에서는 발현되지 않았다.
6. Fibronectin mRNA는 모든 세대에서 발현되었다. 그러나 마지막 세대에서는 미세한 발현을 나타내었다.
7. β-actin는 마지막 세대에서 그 발현 양상이 미세하게 나타났다.
8. 본 연구에서 TIMP-2, telomerase mRNA는 발현되지 않았다.
이상의 결과, 사람치주인대섬유모세포는 노화가 진행되면서 MMP-1, TIMP-1, PDLs22, Type I collagen, Fibronectin mRNA를 다르게 발현시킴을 관찰할 수 있었다. 향후 건강한 사람뿐만 아니라 치주염 환자들에서 채취한 사람치주인대섬유모세포를 이용한 연구가 필요하리라 사료된다.|Human periodontal ligament fibroblast(hPDLF) is very important to cure periodontal tissue because it can be diverged into various cells. This study examined the expression of MMP-1, TIMP-1, periodontal ligament specific PDLs22, Type I collagen, Fibronectin, TIMP-2, telomerase mRNA in a replicative senescence of hPDLF.
hPDLF were isolated and the periodontal ligament tissue was obtained from periodontally healthy and non-carious human teeth extracted for orthodontic reasons at the Chosun University Hospital of Dentistry with the donors' informed consent. The cells were cultured in a medium containing Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM; DMEM, Gibco BRL, USA) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco BRL, USA) at 37C in humidified air with 5% CO2. The 2, 4, 8, 16 passage hPDLF cells of the replicative senescence were used in this study.
For the analysis of the MMP-1, TIMP-1, PDLs22, Type I collagen, and Fibronectin, TIMP-2, telomerase mRNA expression levels, the total RNA of the 2, 4, 8, 16, 18, and 21 passage cells was extracted using a Trizol Reagent (Invitrogen, USA) in replicative hPDL cells, and mRNA expression level was analyzed by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Two passage cells, i.e. young cells, served as the control, and GAPDH served as the internal control for RT-PCR
The results of this study about cell morphology and gene expression according to aging of hPDLF using RT-PCR method are as follows:
1.The size of hPDLF was increased with aging and it was showed that the hPDLF was dying in the final passage.
2.PDLs22 mRNA was expressed in young hPDLF of the two, four, and six passage.
3.TIMP-1 mRNA was expressed in young hPDLF of the two and four passage.
4.There was a tendency that MMP-1 mRNA was weakly expressed over eighteen.
5.Type 1 collagen mRNA was expressed in almost all passages, but it was not expressed in the final passage.
6.Fibronectin mRNA was observed in all passages and it was weakly expressed in the final passage.
7.It was expressed that β-actin was weakly expressed in the final passage.
8.TIMP-2 and telomerase mRNA were not expressed in this study.
Based on above results, it was observed that MMP-1. TIMP-1, PDLs22, Type 1 collagen, Fibronectin mRNA in hPDLF were expressed differently with aging. The study using the hPDLF that is collected from healthy patients and periodontitis patients needs in further study.
Alternative Title
The expression of MMP-1, TIMP-1, and PDLs22 in replicative senescence of human periodontal ligament fibroblast
Alternative Author(s)
Cho, Il-Jun
Affiliation
조선대학교 대학원
Department
일반대학원 치의학과
Advisor
장현선
Awarded Date
2005-08
Table Of Contents
목차
표목차 = ⅱ
도목차 = ⅲ
영문초록 = ⅳ
Ⅰ. 서론 = 1
Ⅱ. 연구재료 및 연구방법 = 3
Ⅲ. 연구결과 = 6
Ⅳ. 총괄 및 고찰 = 12
Ⅴ. 결론 = 16
참고문헌 = 17
Degree
Master
Publisher
조선대학교 대학원
Citation
조일준. (2005). 치주인대섬유모세포의 노화과정에서 MMP-1, TIMP-1, PDLs22의 발현.
Type
Dissertation
URI
https://oak.chosun.ac.kr/handle/2020.oak/5989
http://chosun.dcollection.net/common/orgView/200000234697
Appears in Collections:
General Graduate School > 3. Theses(Master)
Authorize & License
  • AuthorizeOpen
  • Embargo2005-10-20
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