Streptomyces laidlogenes CS684균주에서 신규 단백분해효소의 생산, 정제및 생화학적 특성분석

Abstract

세포외 단백분해효소를 생산하는 미생물은 한국 충남지역의 토양으로부터 분리하여 Streptomyces laidlogenes CS684로 동정하였다. 단백분해효소의 생산은 아래와 같은 조건으로 진행하였다. 1.5％ glucose, 1.5％ oatmeal, 0.3％ K₂HPO₄, 0.3％ Na₂HPO₄가 들어있는 배양액을 28℃에서 24시간 180rpm으로 흔들어주면서 배양시켰다. 이 배양액에서 얻은 두개의 단백분해효소는 황산암모늄에 의한 염석, Sepharose CL-6B 크로마토그래피, DEAE-Sephrose CL-6B 크로마토그래피, 그리고 Sephadex G-75에 의한 겔 여과에 의하여 분리, 정제되었다. SDS―PAGE에서 효소 SⅠ 분자량은 약 45,000Da, SⅡ 분자량은 약 25,000Da으로 나타났다. SⅠ과 SⅡ의 효소활성의 최적 pH는 각각 6.5 및 7.0이었고, SⅠ은 pH 5~10범위에서 안정하였고, SⅡ는 pH 6~8범위에서 안정하였다. 또한, SⅠ과 SⅡ 효소활성의 최적온도는 각각 55℃와 50℃이었다. SⅠ은 45℃에서, SⅡ는 40℃에서 60％의 효소활성을 유지하였다. 두 종류의 효소는 모두 Ni^(2+), Cr^(2+), EDTA, EGTA에 의해 심하게 저해를 받았으며 SDS 및 Triton-100에 대해 강한 저항성을 보였다. 또한, SⅠ은 5％의 에탄올을 첨가했을 때 불안전하였다.|microorganism producing extracellular proteases was isolated in soil sample from in the chonnam province, Korea, and identified as Streptomyces laidlogenes CS684. The optimum medium for production of extracellular proteases was as follows : 1.5％ glucose, 1.5％ oatmeal, 0.3％ K₂HPO₄, 0.3％NaH₂PO₄. The cultures were incubated at 28℃ for 24hrs with agitation 180rpm. Two protease were purified through ammonium sulfate fractionation, Sepharose CL-6B colum chromotography, DEAE-sephrose CL-6B ion exchange chromatography, and gel filtration on Sephadex G-75 column chromatography. Two proteases of molecular weights were estimated to be 45,000 and 25,000Da on SDS―PAGE, respectively. The optimum pHs for the activity of protease SⅠ and SⅡ were 6.5 and 7.0 , respectively. Protease SⅠ and SⅡ were stable in the pH range of 5~10 and 6~8, respectively. The optimum temperatures for the activities of both protease SⅠ and SⅡ were 55℃ and 50℃, respectively. About 60％ of the original protease SⅠ and SⅡ activity remained after being treated at 45 and 40℃ for 60min, respectively. Both enzymes activities were strongly inhibited by Ni^(2+), Cr^(2+), EDTA, EGTA. Two proteases were enhanced by detergents SDS, Triton-100. Protease SⅠ was unstable in the presence of 5％ ethanol.