Isolation and Characterization of Enterococcus faecalis Growing on Mitis-Salivarius Bacitracin Agar Medium

Abstract

최근 세균의 종- 또는 아종-특이 DNA 프로브를 신속하게 검색할 수 있는 "inverted dot blot hybridization screening method"이 개발되었다. 이 방법을 이용하여 치주질환과 관련이 깊은 것으로 알려진 Prevotella intermedia 및 Prevotella nigrescens 종 또는 균주 특이 DNA 프로브들이 개발되었다. 즉, P. nigrescens ATCC 33563에 대한 3가지 프로브, P. intermedia ATCC 25611에 대한 2가지 프로브, 그리고, P. nigrescens ATCC 49046에 대한 1가지 프로브가 클로닝되었다. 이러한 연구 과정 중 Pi30 DNA probe가 inverted dot blot hybridization 실험 결과 P. intermedia 및 P. nigrescens 표준 균주 모두와 hybridization됨을 알게 되었다. 그러므로, 본 연구에서 Southern blot analysis를 통하여Pi30 프로브가 두 세균 종을 균주 수준에서 동정할 수 있는 지 알아보고자 시행하였다. Prevotella intermedia ATCC 25611, P. nigrescens ATCC 49046 및 Prevotella nigrescens ATCC 33563, 지놈 DNA를 HindⅢ, EcoRⅠ, PstⅠ 및 ClaⅠ으로 절단한 다음 전기영동 후 통법의 Southern blot analysis를 시행하였다. 그 결과, Pi30 DNA 프로브에 의해 ClaⅠ 제한 효소를 제외한 나머지 제한효소를 이용할 경우 세 균주를 구별할 수 있었다. 그러므로, Pi30 DNA 프로브는 P. intermedia 및 P. nigrescens 종들을 제한효소절편길이 다양화에 의해 균주 수준에서 동정할 수 있을 것으로 사료된다.|Recently, we isolated 3 bacterial strains that have the similar biochemical characteristics with biotype Ⅳ of mutans streptococci except positive reaction for arginine deaminase. The aim of this study was to both identify and characterize the 3 clinical isolates. The bacteria growing on the MSB agar were identified using biochemical tests as well as 16S rDNA cloning and sequencing methods. To compare the susceptibility for 9 antibiotics between type strains and clinically isolated strains, minimal inhibitory concentration was determined by broth dilution assay. The results revealed that the 3 clinical isolates were identified as E. faecalis. All E. faecalis strains were susceptible to penicillin G, amoxicillin, augmentin, and vancomycin and were resistant to ciprofloxacin, cefuroxim axetil, and clindamycin. These results incated that that E. faecalis could also grow on a MSB agar and its biochemical characteristics is similar to the biotype Ⅳ (S. sobrinus). Therefore, it is suggest that a new selective medium will be needed to isolate mutans streptococci reliably.