Inhibitory Effects of Heparin Derivatives on A549-derived Exosomes
- Issued Date
- 2016
- Abstract
- 엑소좀은 세포에서 분비되는 나노 크기의 입자로, 특정 조직에 상주하는 세포와 융합하여 단백질, 핵산 및 지질을 전달할 수 있는 매개체 역할을 한다. 종양세포로부터 분비된 엑소좀은 그 유래세포에 대한 중요한 정보를 담고 있어, 암전이 억제를 위한 진단 및 치료 표적으로서의 가능성을 지닌다. 헤파란 설페이트 프로테오글리칸은 엑소좀이 그 유래세포로부터 수용세포 안으로 이동할 때 수용체로서 작용하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 헤파란 설페이트와 구조적으로 유사한 헤파린이 헤파란 설페이트와 엑소좀의 상호작용을 경쟁적으로 저해 또는 유도할 수 있을 것으로 가정하여, 본 연구에서는 암세포 유래 엑소좀에 의해 촉진된 암전이에 대한 헤파린 유도체들의 효과를 비교 연구하였다.
폐암세포주인 A549세포로부터 분비되는 엑소좀을 분리하기 위해 세포배양액의 순차적 원심분리 후 초원심분리기법을 적용하였다. 분리한 입자의 물리적 특성을 투과전자현미경, 나노입자 추적 분석 및 동적 광산란을 이용하여 분석하였다. 투과전자현미경 사진을 통해 엑소좀의 소낭성 막 구조를 확인하였다. 나노입자 추적 분석에 의해 측정한 유체역학적 입자 직경의 평균값은 170.8±21.7 nm, 최빈값은 141.0±13.5 nm였으며, 일정 부피 당 입자 개수도 추정 분석하였다. 또한, 분리한 엑소좀 시료의 총단백질을 소혈청 알부민 표준액과 비교하여 정량하였고, 엑소좀 표면에 있는 tetraspanins 중 CD63 및 CD81을 ExoELISA 키트로 검출 정량하였다.
세포 이동 측정 실험에서, 저분자량 헤파린 및 periodate 산화를 통한 저분자량 헤파린 유도체 (0.4 mg/mL)는 A549 유래 엑소좀 (10 μg/well)으로 촉진된 암세포 이동을 완전히 억제하였다. 반면, 비분획 헤파린 및 periodate 산화를 통한 비분획 헤파린 유도체는 동일한 농도에서 저분자량 헤파린 및 periodate 산화를 통한 저분자량 헤파린 유도체에 비해 효과적으로 세포 이동을 억제하지 못했다.
이상에서와 같이, 종양세포에서 분비된 엑소좀은 암전이에 있어 중요한 역할을 하며, 저분자량 헤파린 유도체가 이러한 종양세포 유래 엑소좀의 작용을 억제할 수 있는 가능성을 본 연구를 통해 제시하였다.
- Alternative Title
- A549 세포 유래 엑소좀에 대한 헤파린 유도체의 억제 효과
- Alternative Author(s)
- Sumeet Manandhar
- Affiliation
- 의과학과
- Department
- 일반대학원 의과학과
- Advisor
- 황승림
- Awarded Date
- 2017-02
- Table Of Contents
- TABLE OF CONTENTS
TABLE OF CONTENTS...................................................i
LIST OF FIGURES.........................................................iii
ABBREVIATIONS..........................................................iv
ABSTRACT..................................................................v
I. INTRODUCTION....................................................1
A. Exosome.............................................................1
1. Biogenesis...........................................................2
2. Composition.........................................................4
3. Isolation...............................................................5
4. Function...............................................................6
B. Lung Cancer.........................................................7
1. Small-cell Lung Cancer.........................................8
2. Non-small-cell Lung Cancer..................................8
C. Heparin................................................................9
II. EXPERIMENTAL METHODS..................................11
A. Cell Culture.........................................................11
B. Isolation of Exosomes..........................................11
C. Transmission Electron Microscopy (TEM).............12
D. Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)...................12
E. Dynamic Light Scattering (DLS).............................12
F. Total Protein Quantification....................................13
G. ExoELISA............................................................13
H. Cell Migration Assay.............................................14
III. RESULTS AND DISCUSSION..................................15
A. Physical Properties of Exosomes...........................15
B. Protein Quantification............................................18
1. Total Protein Quantification....................................18
2. ExoELISA...........................................................18
C. Effects of Heparin Derivatives on Cell Migration with Exosomes..................................................................20
IV. CONCLUSION......................................................23
BIBLIOGRAPHY............................................................24
ACKNOWLEDGEMENTS...............................................29
- Degree
- Master
- Publisher
- 조선대학교 대학원
- Citation
- 매낸더 수미트. (2016). Inhibitory Effects of Heparin Derivatives on A549-derived Exosomes.
- Type
- Dissertation
- URI
- https://oak.chosun.ac.kr/handle/2020.oak/13013
http://chosun.dcollection.net/common/orgView/200000265884
- Appears in Collections:
- General Graduate School > 3. Theses(Master)
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