규조류 Chaetoceros salsugineum 감염 nuclear inclusion virus (CsNIV)의 바이러스 유사입자 형성
- Author(s)
- 김민식
- Issued Date
- 2014
- Abstract
- Virus-like particles (VLPs) are non-infectious and immunogenic, virus-mimicking protein assemblies (including host specific binding abilities). The research on this area increasing rapidly towards drug delivery system (DDS), lipoparticle technology and vaccine candidates.
In the present study, the Chaetoceros salsuginium microalgal infecting Chaetoceros salsugineum nuclear inclusion virus (CsNIV) was used to produce VLP. The CsNIV is a 38nm icosahedral virus that replicates within the nucleus of C. salsugineum. The CsNIV capsid protein gene (1.2kb) was cloned into pEt 29b vector. The recombinant pET 29b-CsNIV plasmid was transformed into E.coli BL21(DE3). The CsNIV capsid protein was purified using Ni-NTA affinity column chromatography using elution buffer (20mM Tris-HCl, 300mM NaCl, 250mM imidazole, pH8.0). For further purification was performed in FPLC packed with Sephacryl S-500 resin. The purified VLPs was analysed using native-PAGE and the molecular weight of the VLP was found to be 46kDa. The CsNIV-VLPS was labelled with FITC by dissociation and reassociation process. The VPL and FITC combination was confirmed by 12% (w/v) SDS-PAGE and UV light.
Further experiments need to find out the host specificity of novel algicidal compounds encapsulated with CsNIV-VLPs such as, HPLC analysis, FITC labelling, host specificity test against various diatoms. Therefore, we suggest that this study may help to produce an alternative, specific and highly effective bio-control tool to prevent the harmful algal bloom in marine waters.
- Alternative Title
- Formation of virus-like particles of nuclear inclusion virus (CSNIV) of Chaetoceros salsugineum
- Alternative Author(s)
- Kim, Min Sik
- Affiliation
- 조선대학교 대학원 신재생에너지융합학과
- Department
- 일반대학원 신재생에너지융합학과
- Advisor
- 김시욱
- Table Of Contents
- TABLE OF CONTENTS
LIST OF TABLES
LIST OF FIGURES
ABSTRACT
제 1 장 서 론
제 1 절 연구배경
1. 적조현상
2. 국내 적조발생 현황 및 생물종
3. Chatoceros salsugineum nuclear inclusion virus (CsNIV)
제 2 절 연구목적
제 2 장 실험 재료 및 방법
제 1 절 효소 및 시약
제 2 절 사용균주 및 플라스미드
제 3 절 재조합 DNA 제조
1. 유전자 합성
2. CsNIV 유전자 증폭
3. 유전자 단편 TA 클로닝
4. 플라스미드 정제 및 염기서열 확인
5. 제한효소 처리와 DNA 단편 분리
6. Ligation 및 형질전환
7. Competent cell 제조
8. 형질전환된 균체로부터 재조합 플라스미드 확인
9. SDS-PAGE를 이용한 단백질 발현 확인
제 4 절 CsNIV 캡시드 단백질 발현 및 정제
1. CsNIV 캡시드 단백질 발현
2. 온도 및 IPTG농도에 따른 최적발현 조건 탐색
3. Western blot analysis
4. Cell free extract의 제조
5. Ni-NTA affinity column을 이용한 CsNIV 캡시드 단백질 정제
제 5 절 CsNIV VLPs의 조립
1. Dissociation과 reassociation 과정을 통한 self assembly 유도
2. Gell filtration chromatography를 이용한 VLP 조립 확인
3. CsNIV VLPs의 TEM 형태 관찰
제 6 절 FITC를 이용한 CsNIV 캡시드 단백질의 표지
제 7 절 CsNIV VLP의 숙주 특이적 흡착 관찰
제 3 장 결과 및 고찰
제 1 절 CsNIV 유전자 합성
제 2 절 CsNIV 유전자의 클로닝 및 발현
1. CsNIV 유전자의 클로닝
2. CsNIV 캡시드 단백질의 최적발현 조건 확립
제 3 절 CsNIV 캡시드 단백질 정제
제 4 절 CsNIV VLPs의 조립
1. Dissociation과 reassociation 과정을 통한 self-assembly 유도
2. Gell filtration chromatography를 이용한 VLP 조립 확인
3. CsNIV VLPs의 TEM 형태 관찰
제 5 절 FITC를 이용한 CsNIV 캡시드 단백질의 표지
제 6 절 CsNIV VLPs의 숙주 특이적 흡착 관찰
제 4 장 결론
참고문헌
- Degree
- Master
- Publisher
- 조선대학교
- Citation
- 김민식. (2014). 규조류 Chaetoceros salsugineum 감염 nuclear inclusion virus (CsNIV)의 바이러스 유사입자 형성.
- Type
- Dissertation
- URI
- https://oak.chosun.ac.kr/handle/2020.oak/12082
http://chosun.dcollection.net/common/orgView/200000264638
-
Appears in Collections:
- General Graduate School > 3. Theses(Master)
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- Embargo2015-02-25
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